大鼠海马神经元及星形胶质细胞的体外培养

• 作者: 张楠 张炜 熊文雯 邢媛
• 来源期刊: 神经药理学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞培养 海马 神经元 星形胶质细胞
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 实验方法学
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 分类号: R965.2
• 字数: 4584字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1396.2017.01.003

摘要

目的:改进大鼠海马神经元、星形胶质细胞及两者混合状态的体外培养方法,获得高纯度的海马神经细胞.方法:选取孕期18～20 d的SD大鼠胎鼠作为原代海马细胞培养的材料来源.断头后于冰板上剥离双侧海马,去除表面血管及薄膜,利用眼科剪分离为小块.随后使用冷平衡盐溶液洗涤3次,将海马组织碎块移入酶消化液中.本方法选择Accutase和0.1％DNase作为酶消化液,37℃消化15 min,期间轻柔振动.使用冷平衡盐溶液洗涤3次,终止消化.0.1％DNase加入Neurobasal和B-27的混合液对消化后的海马组织碎块进行轻柔吹打,获得单细胞悬液.将悬液过200目筛,进行细胞计数.将过筛的单细胞悬液移入DMEM培养基(DMEM+10％胎牛血清)中,按照每平方厘米2.5×104的细胞密度进行接种.经PDL孵育的塑料片置于培养基底部.细胞于37℃、5％CO2培养箱内培养.4 h后,依据所需细胞种类的不同,更换相应培养基.海马神经细胞于培养后7～10 d可用于实验.结果:通过本方法可得到高纯度的大鼠海马神经细胞,且根据实验需求,通过更换培养基,可得到纯神经元、纯胶质细胞及两者混合的三种培养状态.培养的神经元及星形胶质细胞纯度均>98％.结论:该文在传统海马神经细胞体外培养方法基础上,进一步降低了实验操作难度,方法稳定有效.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张楠		58	139	6.0	8.0
2	熊文雯	广东省妇幼保健院妇科	7	21	2.0	4.0
3	张炜		11	15	3.0	3.0
4	邢媛		2	2	1.0	1.0