传染性造血器官坏死病核酸疫苗的构建及其在虹鳟接种部位的消长规律

• 作者: 任广明 刘淼 卢彤岩 尹家胜 徐黎明 李渊 赵景壮
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性造血器官坏死病病毒 核酸疫苗 消长 虹鳟
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1280-1287
• 页数: 8页
• 分类号: S941
• 字数: 5735字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2017.16364

摘要

本研究将传染性造血器官坏死病病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)分离株SD-12糖蛋白(glycoprotein,G)基因克隆进商业化载体pcDNA3.1(+),构建了IHNV G的表达载体,即传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis,IHN)核酸疫苗,命名为pIHNsd-G.采用背鳍基部肌肉注射的方式,以2μg/尾的剂量免疫虹鳟(Oncorhynchus mykiss)鱼苗(5.0±0.5)g.于免疫后第4天及第7天,利用real-time PCR技术检测免疫虹鳟头肾及接种部位肌肉组织Mx-1基因表达情况;于免疫后第21天,以100倍半数组织培养感染剂量(tissue culture infective dose,TCID50)采取腹腔注射的方式进行攻毒实验,计算核酸疫苗相对保护率(relative percent sur-vival,RPS);于免疫后第60天及150天检测免疫虹鳟血清IHNV中和抗体效价;最后,以pIHNsd-G的启动子序列和氨苄青霉素抗性基因序列为目标基因,利用PCR方法监测pIHNsd-G在免疫虹鳟接种部位的动态分布情况.结果显示:Mx-1基因在头肾和接种部位肌肉中均显著上调表达,并且在接种部位肌肉组织中明显高于同一时间点的头肾组织;攻毒实验中pIHNsd-G对虹鳟的相对保护率高达94.4%;而在免疫后第60天,所有免疫虹鳟血清中均存在中和抗体,其最高效价高达320,在免疫后第150天,最高抗体效价为80,自此,说明已成功获得有效的IHN核酸疫苗.pIHNsd-G在虹鳟接种部位的PCR监测结果显示:在免疫后的第1天即可在注射部位的肌肉中检测到全部pIHNsd-G目标片段,在第84天时已经无法从注射部位肌肉中扩增出全长氨苄青霉素抗性基因,而所有目标基因在第150天时均消失不见.本研究在成功构建IHN核酸疫苗并系统地验证了其有效性的基础上,开展了该疫苗在接种部位的动态分析研究,为IHN核酸疫苗的研发和安全性评价研究提供了基础数据.