传染性造血器官坏死病核酸疫苗的构建及其抗性基因对环境细菌抗性的影响

• 作者: 任广明 刘淼 卢彤岩 尹家胜 徐黎明 李渊 纪锋 赵景壮
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性造血器官坏死病毒 核酸疫苗 抗性基因 氨苄青霉素 环境释放
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 220-227
• 页数: 8页
• 分类号: S941
• 字数: 5363字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17148

摘要

本研究以传染性造血器官坏死病毒(infectious hematopoietic necrosis virus, IHNV)分离株XJ-13为研究对象,克隆其糖蛋白(glycoprotein, G)基因并连接到商业化载体pcDNA3.1(+), 成功构建了真核表达载体pIHNxj-G.为了检测该载体作为核酸疫苗的可能性,本研究以 2 μg/尾的剂量采用背鳍基部注射免疫虹鳟(Oncorhynchus mykiss)鱼苗[(5±0.5) g].在免疫后第4天及第30天, 以100 TCID50的剂量利用IHNV-XJ-13对虹鳟进行腹腔注射攻毒; 在免疫后第4天及第7天,利用Real-time PCR技术检测虹鳟头肾及接种部位肌肉组织Mx-1基因表达情况;在免疫后第4天及30天检测虹鳟血清IHNV中和抗体效价; 在免疫后65 d内, 分别于不同时间点采集循环水池里的粪便、水以及虹鳟的肠内容物, 进行氨苄青霉素抗性菌的分离鉴定.攻毒试验结果显示, 核酸疫苗在免疫后第4天和第30天的相对保护率均高于90%; Mx-1基因检测结果显示,Mx-1基因在头肾和接种部位肌肉中均显著上调表达;中和抗体效价测定结果显示, 在免疫后第4天, 所有血清中均不存在中和抗体(效价均<20); 而在免疫后第30天, 10尾虹鳟中有8尾血清中存在中和抗体, 最高效价为160; 抗性菌分离结果显示, 分离到的氨苄青霉素抗性菌均是天然具有氨苄青霉素抗性的气单胞菌(Aeromonas sp.)和柠檬酸杆菌(Citrobacter sp.),并未分离到包括大肠杆菌在内的任何具有氨苄青霉素抗性的指示菌, 且实验组和对照组的氨苄青霉素抗性菌的种类和数量均没有发生统计学意义的改变.本研究提供了具有良好保护效果的IHN核酸疫苗, 并为IHN核酸疫苗的安全评价提供了基础数据.