激活素A通过TGFβ/SMAD信号通路促进鸡原始生殖细胞增殖

• 作者: 于敏莉 李铭 杜文兴 虞德兵
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 原始生殖细胞(PGC) 激活素A 存活 增殖
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 537-546
• 页数: 10页
• 分类号: S831.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.04.003

摘要

原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)是一类具有分化潜能的生殖细胞.为了检测激活素A(activin A)对鸡胚血液PGCs体外存活和增殖的影响,本研究从第13～15期鸡胚血液中分离提取PGCs,并进行鉴定;在完全培养液中分别添加0和100 ng/mL activin A培养48 h后,检测PGCs数目、形态及细胞周期;检测Dazl (deleted in azoospermia-like)基因甲基化水平;并通过Western blot检测转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路中TGF-β、SMAD2/3的表达和磷酸化变化.结果显示,从鸡胚血液中分离的PGCs,经过红细胞裂解液处理和传代后,可获得高纯度PGCs,且具有良好的生长趋势.培养的PGCs呈阶段特异性胚胎抗原(stage specific embryonic antigen 1,SSEA-1)、鸡(Gallus gallus)VASA同源基因(chicken vasa homologue,CVH)免疫染色和过碘酸希夫(periodic acid schiff reaction,PAS)反应染色阳性,并且表达多能性相关基因PouV、Nanog和Sox2 (SRY (sex determining region Y)-box 2),表明经过体外培养后,鸡胚血液PGCs仍能维持其生物学特性.添加activinA,可显著降低PGCs中Dazl基因甲基化水平,提高PGCs的体外存活能力.activinA处理后,显著增加了PGCs的数量;上调细胞周期蛋白(cyclins)及细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)的表达;流式细胞检测进一步证实了activinA增加S/G2期PGCs细胞的比例.activin A显著上调了TGF-β蛋白的表达,促进SMAD2/3的磷酸化.以上结果表明,activinA可通过激活TGF-β/SMAD信号通路显著提高PGCs的体外存活和增殖能力.研究结果为揭示activinA对鸡胚PGCs增殖的作用机制提供了依据,为利用PGCs体外培养模型进一步深入研究生殖细胞发育调控提供基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜文兴	南京农业大学动物科技学院	66	605	15.0	22.0
2	虞德兵	南京农业大学动物科技学院	36	358	12.0	17.0
3	于敏莉	南京农业大学动物科技学院	9	31	2.0	5.0
4	李铭	南京农业大学动物科技学院	2	1	1.0	1.0