密码子优化后的αB-晶状体蛋白基因毕赤酵母重组质粒的构建及表达的初步研究

• 作者: 冯雪 刘堰 牛纯青 高香
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: αB-晶状体蛋白基因 巴斯德毕赤酵母 密码子优化 表达优化 分子伴侣活性
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 42-47
• 页数: 6页
• 分类号: Q816
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20170709

摘要

αB-晶状体蛋白属于小热休克蛋白家族,具有分子伴侣活性.在阿尔茨海默病大脑中,星形胶质细胞表达的βB-晶状体蛋白明显上调,并且这些上调的αB-晶状体蛋白紧密地分布在β-淀粉样蛋白沉积周围.为了在分子水平上研究胞外αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中的作用机制,需要获得大量具有生物学活性的αB-晶状体蛋白.根据毕赤酵母密码子偏好性对人αB-晶状体蛋白基因进行优化,并在目的基因3'端加上6个组氨酸标签,优化后的基因克隆到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K上;电转入毕赤酵母GS115中;优化确定最佳表达条件为:BMGY与BMMY的转接比为2:1,表达时间为72h,甲醇补加终浓度为0.5％;经Western blotting鉴定,获得20kDa的目的蛋白,以及18.6kDa和13.1kDa两个蛋白质片段,重组目的蛋白出现了部分降解,纯化获得20kDa目的蛋白;利用胰岛素还原法测定该片段具有分子伴侣活性,为进一步研究外源αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中对星形胶质细胞的保护机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘堰	西南大学生命科学学院	19	174	6.0	13.0
2	牛纯青	西南大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0
3	高香	西南大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0
4	冯雪	西南大学生命科学学院	4	4	1.0	2.0