人LL-37与干扰素α2a密码子的优化及其在毕赤酵母中的融合表达

• 作者: 张明杰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 干扰素α2a LL-37 融合 表达
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 206-213
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

通过密码子优化，在毕赤酵母中高效表达人LL-37与IFN-α2a融合蛋白。先按P. pastoris密码子偏好性对LL-37与IFN-α2a的原始密码子进行了改造，并在二者之间加上GlyGlyGlyGlySer的柔性连接接头，人工合成设计的新序列，最后通过pPIC9K载体将其整合入P. pastoris GS115的基因组，构建出重组菌株GS115LI。利用遗传霉素浓度梯度筛选出两株高拷贝的GS115LI1和GS115LI2菌株。对这两株菌经发酵诱导后的发酵液进行SDS-PAGE检测、抗病毒活性检测和抗菌活性检测，证明重组株既能够成功表达出LL-37与IFN-α2a的融合蛋白，而且该融合蛋白成功保留了抗菌肽与干扰素的功能活性。诱导发酵后，融合蛋白的产量可达到819.1 mg/L，经盐析、疏水层析和离子交换层析分离，可得到纯度达97%的融合蛋白产物，回收率可达到46.2%，纯化后产品的效价可达2.6×108 IU/mg。经过密码子优化后，成功实现在毕赤酵母中高效表达出既有LL-37抗菌活性又具有干扰素α2a活性的融合蛋白。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张明杰		2	0	0.0	0.0