口疮病毒O2O基因的克隆、表达及多抗制备

• 作者: 徐前明 杨侃侃 梅跃辉 殷冬冬 潘飞 王勇 王君 白彩霞 蒋书东 赵玉洁 颜秀梅
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 羊口疮病毒 O2O基因 克隆 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 动物科学与动物医学
• 页码范围: 780-783
• 页数: 4页
• 分类号: S858.26
• 语种: 中文
• DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20171017.025

摘要

羊口疮是由口疮病毒(orf virus,ORFV)引起的接触性、嗜上皮性的传染病.O2O基因是该病毒重要的酶活力调节蛋白.根据GenBank中O2O基因的序列设计引物,从ORFV-F10株感染的病料中提取DNA,PCR扩增获得目的基因.然后将其亚克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒pET-32a-ORF-020.鉴定正确后转化BL21感受态细胞,进行IPTG诱导表达.表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析.最后将纯化的020蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多抗血清.SDS-PAGE结果表明,ORFV O2O基因在体外获得正确表达,大小约37 kDa.Western-blot结果表明,制备的多抗血清能够与O2O蛋白发生特异性反应具有良好的反应原性.