猪链球菌2型转录调控因子Rex原核表达及体外结合活性分析

• 作者: 何孔旺 王勇 祝昊丹 范红结
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪链球菌 Rex 调控因子
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 680-684
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3140字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2017.08.003

摘要

目的 克隆猪链球菌2型转录调控因子Rex的编码基因进行原核表达和纯化,对其进行生物信息学分析和体外结合活性测定.方法 PCR扩增猪链球菌2型强毒株SS2-1的Rex基因编码区,将其克隆入pET28a质粒中,再将pET28a-Rex重组质粒转入大肠杆菌表达菌BL21 (DE3)中,重组菌株经IPTG诱导后能表达出猪链球菌Rex蛋白;通过体外凝胶迁移实验(EMSA)对Rex蛋白与DNA的结合活性进行分析.结果 成功地原核表达并纯化了Rex重组蛋白.Rex蛋白与自身启动子Prex特异性结合,高浓度的NADH抑制两者的结合活性,而NAD+对结合没有影响.结论 通过体外结合试验发现Rex是通过响应NADH/NAD+平衡来调控自身基因的表达.