人巨细胞病毒微小RNA miR-US4-5p靶向抑制PAK2的表达

• 作者: 柳中洋 蒋树娟 解立怡 邵耀中 郭鑫 阮强 黄郁晶 齐莹
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人巨细胞病毒 微小RNAs p21激活激酶
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 808-812
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3517字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2017.08.011

摘要

目的 寻找人巨细胞病毒微小RNA miR-US4-5p调控的靶mRNA,检测miR-US4-5p对靶mRNA PAK2蛋白质表达的调节作用.方法 采用Hybrid-PCR方法及Targetscan软件分析从人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞总RNA中筛选候选靶mRNA;应用荧光素酶实验,通过构建PMIR-PAK2报告基因,将其和miR-US4-5p、miRNA阴性对照共转染到HEK293细胞中,验证miR-US4-5p与候选靶mRNA的结合能力;应用Western blot方法,通过将miR-US4-5p、miRNA阴性对照分别转染到HEK293细胞、HELF细胞、THP-1细胞中,验证转染miR-US4-5p对靶mRNA蛋白质表达的调节作用.结果 通过Hybrid-PCR方法及Targetscan筛选出12个miR-US4-5p的待选靶mRNA;荧光素酶实验表明:与转染miRNA阴性对照相比,转染miR-US4-5p可以显著地下调PMIR-PAK2的荧光素酶活性,从而验证了miR-US4-5p与PAK2的结合性,在HEK293细胞、HELF、THP-1细胞中PAK2可以被过表达的miR-US4-5p造成不同程度的下调.结论 人巨细胞病毒表达的miR-US4-5p在三种不同细胞系中具备抑制PAK2蛋白质表达的能力.