利用EMA-qPCR建立快速检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法

• 作者: 周大祥 殷幼平 熊书 王中康
• 来源期刊: 植物保护
• 学科: 农学
• 关键词: 猕猴桃溃疡病菌 叠氮溴乙锭 实时荧光定量PCR 活菌检测
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 实验方法与技术
• 页码范围: 143-148
• 页数: 6页
• 分类号: S436.634.12
• 字数: 4492字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-1542.2017.03.024

摘要

利用叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合(EMA-qPCR),建立了一种有效快速检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法.以猕猴桃溃疡病菌ITS序列为检测靶标,菌体经EMA渗透处理,再进行qPCR特异性扩增.结果显示,qPCR检测灵敏度为2 cfu;当EMA的浓度为2.0 μg/mL时,能有效抑制1.0×107 cfu/mL经高温灭活的死菌的扩增,对活菌的扩增没有影响.当活菌数在1.0×101～1.o×105 efu范围内,每个qPCR反应体系中活菌数与Ct值呈线性相关(R2 =0.988).不同温度处理活菌菌悬液后用EMA-qPCR检测猕猴桃溃疡病菌的存活情况并与平板计数法进行比较,结果表明待检样品可在4℃和20℃短期保存.对疑似带病猕猴桃材料进行EMA-qPCR检测,结果表明能减少猕猴桃溃疡病菌PCR的假阳性结果.本研究建立的EMA-qPCR方法是一种有效检测猕猴桃溃疡病菌活菌的方法,能有效避免PCR检测实际样品可能造成的假阳性结果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王中康	重庆大学生命科学学院重庆市基因功能与调控重点实验室	57	766	16.0	25.0
2	周大祥	重庆三峡学院生命科学与工程学院	39	159	7.0	11.0
4	殷幼平	重庆大学生命科学学院重庆市基因功能与调控重点实验室	57	718	14.0	23.0
7	熊书	重庆三峡医药高等专科学校基础医学部	29	57	4.0	6.0