番茄溃疡病菌LAMP快速检测方法的建立

• 作者: 刘大群 周颖 张娜 李建嫄 杨文香 贵亚欣 赵赛
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 番茄溃疡病菌 环介导等温扩增方法 快速检测
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 19-23
• 页数: 5页
• 分类号: S436.412
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2015.0053

摘要

以SYBR Green I为指示剂，建立了番茄溃疡病菌的环介导等温扩增可视化快速检测方法。根据番茄溃疡病菌特异的核糖体转录间隔区序列设计了4条引物进行LAMP扩增，通过对体系中各成分进行优化，最终确定25μL反应体系中模板200 ng ，MgSO4的适宜浓度为3．0 mmol／L ，Bst DNA聚合酶2 U ，dNTPs的适宜浓度为0．3 mmol／L ，外引物与内引物之比为1∶3时扩增效果较好，在65℃最佳反应时间为40 min。在优化的体系条件下，获得的反应产物经SYBR Green I染色后，肉眼观察检测灵敏度可达到50 CFU／mL ，且对番茄溃疡病菌的检测具有高度的特异性。结果表明，该方法快速、准确、灵敏、特异，具有良好的实用性。