血管生成素-2基因沉默载体构建及其对肝癌细胞的作用

• 作者: 何攀文 吴建红 朱清静 李霞 韩晓群
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 ang-2基因 质粒构建 慢病毒 肝癌
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 肿瘤学研究
• 页码范围: 552-555
• 页数: 4页
• 分类号: R73-36
• 语种: 中文
• DOI: 10.14188/j.1671-8852.2017.04.009

摘要

目的:构建血管生成素(ang)-2基因沉默载体,并研究其对肝癌hepG2细胞株的作用.方法:根据ang-2基因序列设计shRNA,并与载体pLVX-shRNA连接,转化感受态细胞,提取质粒测序鉴定.将慢病毒shRNA载体及其辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,在HEK293T细胞中标定其病毒滴度.用包装好的慢病毒以及慢病毒阴性对照感染靶细胞hepG2,感染成功后通过Western Blot方法评价干扰载体对靶基因的干扰效果,并采用MTT法检测其对靶细胞增殖率的影响.结果:酶切鉴定和测序结果证实成功构建了ang-2基因沉默载体.包装并浓缩慢病毒,滴度为1×108 TU/ml.将ang-2基因沉默载体感染hepG2细胞,倒置显微镜下可见绿色荧光.West-ern Blotting检测ang-2蛋白表达水平较对照组明显降低(P＜0.05),而对hepG2细胞增殖率无明显影响.结论:成功构建了ang-2基因沉默载体并感染靶细胞hepG2,证实其对目的基因具有很好的沉默效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李霞		11	44	4.0	6.0
2	吴建红		16	53	6.0	6.0
3	韩晓群		15	70	5.0	7.0
4	何攀文	武汉市中心医院检验科	4	13	2.0	3.0
5	朱清静	宜春学院医学院微生物与免疫学教古代室	1	0	0.0	0.0