犬DEA1.1血型犬源单链抗体库构建及筛选

• 作者: 丛霞 姜忠玲 曹荣峰 李华涛 田文儒
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬DEA1.1血型 单链抗体(scFv) 噬菌体展示技术 犬源抗体库
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 901-910
• 页数: 10页
• 分类号: S858.28
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.06.005

摘要

在我国缺乏用于犬(Canis lupus familiaris)血型鉴定的检测试剂,本研究目的在于制备犬DEA 1.1血型鉴定抗体,为宠物犬输血前血型鉴定提供材料.本研究以比格犬为研究对象,以外周血淋巴细胞为抗体基因来源,设计犬抗体可变区基因简并引物,用反转录聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)合成cDNA,扩增抗体重链可变区(heavy chain variable region gene,VH)和轻链可变区(light chain variable region gene,VL)基因,用重叠延伸PCR将VH和VL通过Linker连接重组单链抗体(single chain antibody variable fragment,scFv)的基因片段,将scFv基因连接至噬菌体载体pCANTAB 5E,构建犬源单链抗体scFv文库,用斑点酶联免疫吸附测定(dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-ELISA)方法和犬红细胞抗原1.1 (dog erythrocyte antigen 1.1,DEA1.1)血型免疫库为基础,进行3轮筛选.以鉴定阳性的克隆为基础,构建了原核表达重组单链抗体蛋白.结果表明,犬抗体可变区简并引物有效可用,并成功构建犬源单链抗体scFv文库.构建的免疫库实际库容量为7×105,具有多样性和足够大的库容量.最终筛选到3株能够与犬DEA1.1血型抗原相结合的单链抗体.检测鉴定原核表达的Clone16蛋白为可溶蛋白.亲和纯化获得Clone16单链抗体进一步用临床样本验证,具有较强结合特性.本研究为制备犬DEA 1.1血型鉴定试剂提供了理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹荣峰	青岛农业大学动物科技学院	101	286	9.0	12.0
2	田文儒	青岛农业大学动物科技学院	74	218	8.0	9.0
3	姜忠玲	青岛农业大学动物科技学院	44	161	7.0	9.0
4	李华涛	青岛农业大学动物科技学院	34	100	6.0	8.0
5	丛霞	青岛农业大学动物科技学院	37	140	8.0	9.0