弓形虫ATG6基因敲除虫株的构建及其生长特性鉴定

• 作者: 曹世诺 李昭然 王铭 贾洪林 陈运通
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 敲除 ATG6 自噬 弓形虫
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 886-890,896
• 页数: 6页
• 分类号: S852.7
• 字数: 4367字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201703046

摘要

酵母ATG6蛋白是磷脂酰基醇-3激酶(PI3K)复合物Ⅰ的组成成分,在自噬起始阶段促进自噬小体的形成.为研究弓形虫ATG6同源蛋白(TgATG6)生物学功能,本研究首先构建进化树对TgATG6基因进行同源性分析,并通过构建稳定表达红色荧光的(ATG6-mCherry)虫株,以检测TgATG6的亚细胞定位情况.通过CRISPR/Cas9技术制备TgATG6基因缺失虫株,采用流式细胞术对该虫株的生长特性进行检测.实验结果显示,TgATG6基因在进化关系上与植物来源的ATG6同源关系较近.TgATG6在虫体内呈弥散分布,经16h饥饿诱导后,该蛋白在弓形虫体内发生聚集.经序列分析显示,成功获得了两种TgATG6基因缺失虫株(△TgATG6-1和△TgATG6-2).在△TgATG6-2虫株中,TgATG6基因开放阅读框的593～612位点之间插入了226 bp外源序列,而在△TgATG6-2中,不能够有效扩增靶序列,表明两种突变虫株的TgATG6基因均被有效插入失活.此外,该基因的缺失可能影响了虫株侵入宿主细胞的能力.TgATG6基因缺失株的成功制备为进一步研究TgATG6蛋白功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾洪林	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	6	26	2.0	5.0
2	李昭然	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
3	曹世诺	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
4	王铭	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	3	2	1.0	1.0
5	陈运通	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	1	1	1.0	1.0