湖羊Sp1基因CDS区克隆及其对颗粒细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 姚一龙 孟春花 安外尔·热合曼 张俊 曹少先 李隐侠 王慧利 钱勇
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: Sp1基因 过表达载体构建 KGN-细胞 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 2098-2106
• 页数: 9页
• 分类号: S826.2
• 字数: 5290字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.11.011

摘要

旨在探讨湖羊Sp1基因序列特征及其对颗粒细胞增殖及凋亡的影响.采用克隆、测序获得湖羊Sp1基因CDS区并用生物信息学方法分析其序列特征;NJ方法构建基于Sp1氨基酸序列的系统进化树;RT-PCR方法检测Sp1基因湖羊组织表达谱;克隆方法构建湖羊Sp1过表达载体;试剂盒检测Caspase-3活性和CCK-8值;利用流式细胞术检测人卵巢颗粒细胞(KGN)凋亡率.结果表明,湖羊Sp1 CDS区长2 340 bp,编码779个氨基酸残基,与人的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别为94.28％和95.75％;湖羊与牛的亲缘关系最近;Sp1基因在湖羊卵巢、卵泡等组织中广泛表达.本研究成功构建了湖羊Sp1过表达载体并转染人卵巢颗粒细胞(KGN);试验组Caspase-3活性显著高于对照组(P＜0.05),CCK-8值检测结果相反.表明过表达Sp1基因抑制KGN-细胞增殖(P＜0.05)、促进KGN-细胞凋亡(P＜0.05).Sp1基因在哺乳动物中高度保守,湖羊Sp1基因可抑制人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖、诱导其凋亡.