PE、EV71及CoxA16基因探针的制备

• 作者: 侯佩强 倪楠 吕静 张荣强 韩彬 魏希文
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠道病毒 EV71 COXA16 基因探针 分子杂交
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1185-1187,1210
• 页数: 4页
• 分类号: R373.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.171212

摘要

目的 制备地高辛标记基因探针,利用分子杂交试验同时检测手足口病患者粪便标本中的肠道病毒(Pan-enterovirus,PE)、肠道病毒71型(Enterovirs 71 EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16). 方法 根据GenBank已发表的基因序列,分别在PE、EV71、CoxA16保守区设计3对特异性寡核苷酸引物,进行实时荧光定量PCR检测.从PE、EV71、Co xA 16阳性标本中分离病毒,提取RNA,以RT-PCR扩增产物作为基因探针的目的基因,采用随机引物法进行Digxigenin-11-dUTP标记,采用分子杂交试验检测3种基因探针的灵敏性和特异性. 结果 RT-PCR分别扩增出116、226、208 bp目的基因片段,经标记后作为检测PE、EV71、CoxA16的3种高纯度的基因探针,对相应病毒RNA的最低检出限均为1 pg,可分别与PE(+)、EV71(+)、CoxA16(+)标本提取的RNA发生特异性杂交,与乙型脑炎病毒、诺如病毒、轮状病毒、H3N2、甲型H1N1流感病毒的核酸无杂交反应. 结论 制备的PE、EV71及CoxA16基因探针灵敏、特异,操作简单,适用于手足口病病原的实验室检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏希文		4	4	1.0	2.0
2	侯佩强		22	25	2.0	4.0
3	张荣强		13	17	2.0	3.0
4	倪楠		7	26	2.0	5.0
5	韩彬		3	3	1.0	1.0
6	吕静		1	0	0.0	0.0