人巨细胞病毒Han株US12基因缺失株的构建及其在人胚肺成纤维细胞中的复制

• 作者: 刘畅 卢颖 柳中洋 王鸿雁 郑博 阮强 韩丽英 马艳萍 高爽 黄郁晶 齐莹
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 巨细胞病毒 US12 细菌人工染色体 生长曲线
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 489-494,500
• 页数: 7页
• 分类号: R373.9
• 字数: 4499字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258?4646.2017.06.003

摘要

目的 构建人巨细胞病毒(HCMV)Han株US12基因缺失的BAC毒株,研究US12产物对HCMV Han株在人胚肺成纤维细胞(HELF)中复制的影响.方法 以侧翼含有US12基因同源序列的PCR引物扩增卡那霉素抗性基因,电转至含有Han株BAC质粒的大肠杆菌DY380?Han?wt?BAC,PCR及DNA测序验证US12缺失的病毒序列.将缺失突变质粒Han?ΔUS12?BAC?P电转至HELF,获得感染性病毒颗粒Han?ΔUS12?BAC.以MOI为0.1的Han?ΔUS12?BAC毒株及Han?wt?BAC毒株感染HELF,TCID50法测定上清中病毒滴度,绘制病毒增殖曲线.结果 成功构建了Han?ΔUS12?BAC克隆,转染HELF后成功获得感染性病毒.生长曲线实验结果表明,ΔUS12缺失和野生型毒株在HELF中复制增殖与扩散水平无明显差异.结论 US12为HCMV临床株Han在HELF中增殖和扩散过程中的非必需基因.