Yes相关蛋白1短发卡RNA质粒构建及其对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

• 作者: 王行环 董锐
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 膀胱癌 Yes相关蛋白1 短发卡RNA RNA干扰 增殖 迁移
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 泌尿外科
• 页码范围: 2042-2045
• 页数: 4页
• 字数: 3279字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2017.12.008

摘要

目的 用RNA干扰技术阻断人膀胱癌T24细胞中Yes相关蛋白1(YAP1)基因的表达,观察细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化.方法 检测人膀胱癌T24细胞中YAP1表达水平;采用真核转录质粒pGreenPuro构建针对YAP1基因的重组转染质粒.将4种不同序列的YAP1短发卡RNA(shRNA)质粒以及含与YAP1无关序列的对照质粒(YAP1 shRNA NC)分别转染T24细胞,48 h后行实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其YAP1表达水平,筛选YAP1基因沉默效果最好的shRNA质粒干扰T24细胞;使用噻唑蓝(MTT)检测shRNA质粒对T24细胞增殖能力的影响、划痕实验检测其对迁移能力的影响、Transwell小室体外侵袭实验检测侵袭能力的影响.结果 RT-qPCR检测T24细胞阳性表达YAP1基因,用Lipofectamine 2000成功将不同YAP1 shRNA质粒转染入T24细胞;RT-qPCR检测发现YAP1 shRNA3质粒沉默T24细胞YAP1表达效果最显著(抑制率为75.5％),随后用YAP1 shRNA3质粒干扰T24细胞,MTT检测结果显示转染YAP1 shRNA3质粒组T24细胞增殖能力小于空白对照组(干扰组增殖率为空白对照组的85.9％,P=0.000);转染YAP1 shRNA3的T24细胞迁移能力较空白对照组低[24h平均划痕宽度分别为(218.50±3.50) μm和(86.5±4.50) μm,P=0.003];转染YAP1 shRNA3的T24细胞侵袭能力较空白对照组弱(穿透Transwell小室的平均细胞数62∶ 345,P=0.000).结论 用RNA靶向干扰能明显降低人膀胱癌T24细胞内的YAP1基因表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王行环	武汉大学中南医院泌尿外科	103	444	12.0	15.0
2	董锐	武汉大学中南医院泌尿外科	1	2	1.0	1.0