红肉苹果分裂素响应基因MdMYB308的克隆与表达分析

• 作者: 姜生辉 张宗营 张静 曲常志 王意程 王楠 许海峰 陈学森
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 苹果 分裂素 MdMYB308 酵母双杂 双分子荧光互补
• 年，卷（期）: 2017,（21）
• 所属期刊栏目: 园艺
• 页码范围: 4178-4185
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.21.012

摘要

[目的]细胞分裂素是调控植物花青苷合成的重要激素,从新疆红肉苹果杂种一代优系‘紫红3号’中克隆得到分裂素响应基因MdMYB308,研究其在细胞分裂素调控苹果花青苷合成中的作用,为进一步完善红肉苹果育种的理论与技术体系提供参考.[方法]以红肉苹果‘紫红3号’(新疆红肉苹果与‘富士’杂交1代)的红色幼嫩叶片为外植体诱导的红色愈伤组织为试材,设计引物利用PCR克隆MdMYB308,对其进行生物信息学分析;并用不同浓度细胞分裂素处理,采用荧光定量PCR分析MdM YB308及花青苷合成相关基因的表达;通过酵母双杂交试验、荧光双分子互补试验验证MdMYB308与MdbHLH3的互作关系.[结果]在‘紫红3号’中克隆获得MdMYB308全长,其包含768 bp完整的开放阅读框,编码255个氨基酸,预测其编码蛋白质分子量为28.37 kD,等电点为8.94;系统进化树分析表明,MdMYB308与AtMYB4、FaMYB1、AtMYBL2在同一个进化枝上,氨基酸序列比对发现,MdMYB308蛋白存在EAR抑制序列;提高6-BA浓度有利于苹果愈伤组织花青苷的累积,与无细胞分裂素处理相比,1 mg·L-1 6-BA处理愈伤花青苷合成结构基因MdCHS、MdDFR、MdUFGT与转录基因MdMYB10、MdbHLH3的表达量升高,而MdM YB308表达被抑制;酵母双杂交与荧光双分子互补试验表明,MdMYB308与MdbHLH3能相互作用.[结论]细胞分裂素(6-BA)可能通过抑制MdMYB308的表达影响MdMYB308与MdbHLH3的结合从而促进花青苷的累积.