新疆红肉苹果转录因子MsMYB10基因的克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 冯守千 刘遵春 宋杨 张艳敏 王延玲 王海波 田长平 陈学森
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 新疆红肉苹果 MsMYB10转录因子 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（13）
• 所属期刊栏目: 园艺
• 页码范围: 2735-2743
• 分类号: S6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.13.013

摘要

[目的]克隆新疆红肉苹果[Malus sieversiif.neidzwetzkyana(Oieck)Langenf]MYB10转录因子基因,进行序列分析和原核表达研究,为进一步探索红色发育机理及选育新的栽培红肉苹果奠定理论基础.[方法]根据MdMYB10基因编码区设计1对特异引物,以新疆红肉苹果叶片总RNA为模板,通过RT-PCR获得1个约700 bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定,并对该序列进行分析.随后将该基因片段连接到原核表达载体pET-30a(+)中,构建融合表达质粒,转化到及coli BL21(DE3)中进行表达.[结果]测序结果显示,RT-PCR获得的cDNA全长包含完整的cDNA开放读码框732 bp,编码244个氨基酸,命名为MsMYBIO.MsMYB10分子量为28.56 kD,等电点为8.41,GenBank登录号为GQ500894.该蛋白具有R2R3MYB结构域,结构域中有保守的色氨酸残基,在C端有1个富含酸性氨基酸的转录激活区.与已知MdMYB10的氨基酸序列的同源性为98%.另外,MsMYB10没有信号肽,具有核定位信号.进化树分析表明,MsMYB10与调控花青苷合成的转录因子MdMYB10亲缘关系最近,处在同一进化枝.SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白与预期蛋白大小一致.[结论]克隆了新疆红肉苹果转录因子MsMYB10基因,并可在大肠杆菌中转化表达.为进一步纯化和鉴定目的蛋白及研究其功能奠定了试验基础.