鳗鲡疱疹病毒ORF115基因克隆、转录时相分析及原核表达

• 作者: 陈曦 杨金先 陈华 陈强 葛均青 福建省农业科学院生物技术研究所
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 鳗鲡疱疹病毒(AngHV) ORF115基因 转录时相 原核表达 晚期基因
• 年，卷（期）: 2023,（9）
• 所属期刊栏目: 水产病害防治与水产品质量安全
• 页码范围: 192-199
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

【目的】克隆鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus,AngHV）ORF115基因，获得ORF115基因序列生物信息学特征，分析其在病毒入侵细胞过程中的转录时相并进行原核表达，为解析ORF115基因的特性和功能及开发免疫学诊断技术和亚单位疫苗打下基础。【方法】根据GenBank已公布AngHV参考株（NC＿013668）的基因序列，设计特异性引物扩增ORF115基因，从分离的AngHV-FJ福建株（AngHV-FJ）基因组中扩增出ORF115基因，克隆至pMD19-T载体，经酶切鉴定和测序验证，获得ORF115基因序列。采用Softberry、ProtParam、TMHMM、SignalP 5.0、PSORTⅡ及BepiPred等在线软件进行生物信息学分析；采用反转录PCR(RT-PCR)对ORF115基因进行转录时相分析；将ORF115基因克隆至表达载体p ET-32a，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测及Western blotting鉴定。【结果】克隆获得的AngHV-FJ ORF115基因全长318 bp，与GenBank已发布的参考序列相似性为100%；生物信息学预测表明，AngHV-FJ ORF115基因编码蛋白的分子量为11.8 kD，理论等电点（p I）为6.04，不稳定系数为16.38，总平均亲水性指数为0.172，属酸性弱疏水蛋白，较稳定；OR115蛋白存在跨膜结构，无信号肽，主要分布于细胞质中，有长片段抗原表位；转录时相分析结果表明，ORF115基因的转录本在病毒感染细胞后6 h即可检出，于感染24 h达峰值，随后无明显变化，属于病毒晚期基因。SDS-PAGE及Western blotting分析结果显示，ORF115基因可在大肠杆菌中表达，表达蛋白大小与预期一致，约32 kD。【结论】AngHV ORF115基因属于病毒晚期基因，其编码蛋白属酸性弱疏水蛋白，有长片段抗原表位，可能在病毒感染晚期发挥作用。获得的ORF115原核表达蛋白可用于制备多克隆抗体及AngHV亚单位疫苗开发。