牡蛎疱疹病毒囊膜蛋白(ORF111)的基因克隆及表达

• 作者: 张淑敏 李亚楠 李晨 王崇明 白昌明 辛鲁生
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 牡蛎疱疹病毒 囊膜蛋白 原核表达 魁蚶
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 183-190
• 页数: 8页
• 分类号: S944.4+4
• 字数: 6260字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20190709001

摘要

本研究对编码牡蛎疱疹病毒(Ostreid herpesvirus 1,OsHV-1)囊膜蛋白的orf111基因进行了生物信息学分析、克隆和表达.首先,通过特异性PCR扩增得到orf111基因全长序列,并对其编码囊膜蛋白的理化性质、高级结构、跨膜区和抗原决定簇等进行生物信息学分析.结果 显示,orf111编码一种稳定的疏水性蛋白,具有5个跨膜结构域和9个抗原决定簇,同时,氨基酸序列中还包含1个高度保守的精氨酰-甘氨酰-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)结构域.随后,构建了pET28a-orf111重组质粒,并将其转化到大肠杆菌DH5a感受态细胞中.最后,通过使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,表达产物分子量约为32 kDa.本研究应用原核表达得到了含RGD结构域的OsHV-1囊膜蛋白,为进一步制备ORF111蛋白单克隆抗体及开展牡蛎疱疹病毒侵染机制的研究奠定了重要基础,为将来OsHV-1的防控工作提供新的思路.