鲤疱疹病毒3型ORF136基因编码蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 任燕 曾伟伟 李莹莹 王庆 王英英 石存斌 郑树城
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鲤疱疹病毒3型 锦鲤疱疹病毒 ORF136 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 204-210
• 页数: 7页
• 分类号: S941
• 字数: 4565字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17050

摘要

为了对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3)ORF136基因编码蛋白进行功能研究和血清学诊断,本实验通过对ORF136基因推导的第31~157位氨基酸序列进行PCR扩增,并与原核载体pET-32a(+)连接,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态后进行IPTG诱导表达,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰白兔(Oryctolagus cuniculus)以制备ORF136多克隆抗体, 运用Western blot和间接免疫荧光技术对抗体进行鉴定.结果表明, 重组融合表达蛋白大小与预期一致, 约为35 kD, 且主要分布在包涵体中.Western blot分析显示, 免疫兔后获得的纯化ORF136多克隆抗体能特异性识别纯化的CyHV-3和感染CyHV-3的KS细胞; 间接免疫荧光分析进一步表明ORF136多抗能识别感染CyHV-3的KS细胞.ORF136多克隆抗体的制备为ORF136蛋白功能研究和CyHV-3血清学诊断方法的建立提供了重要基础.