摘要:
目的 研究重组人精氨酸酶对人脑胶质瘤细胞U87的杀伤作用.方法 培养人脑胶质瘤细胞U87,将对数生长期人脑胶质瘤细胞U87随机分为12组:对照组仅加等量的培养液,其余11组实验组以倍比稀释的方式分别给予质量浓度为0.2×10-3,0.5×10-3,0.1×10-2,0.2×10-2,0.4×10-2,0.8×10-2,1.6×10-2,3.2×10-2,6.3×10-2,1.25×10-1,0.25 U·mL-1的重组人精氨酸酶,用甲基噻唑蓝四氮唑盐(MTT)法检测各组人脑胶质瘤细胞U87细胞活力的变化;倒置显微镜观察U87细胞经重组人精氨酸酶作用后的形态学变化;Western blotting法检测精氨酸琥珀酸合成酶(ASS)的表达.重组人精氨酸酶作用于人脑胶质瘤细胞U87时,分成补充L-精氨酸组和不补充L-精氨酸组,用MTT法检测人脑胶质瘤细胞U87细胞活力的变化.结果 不同质量浓度的重组人精氨酸酶作用U87细胞72 h后,U87细胞的活力均降低且呈明显的剂量依赖性,0.2 ×10-2,0.8×10-2,1.6×10-2,0.25 U·mL-1实验组的细胞活力分别为75.12%,52.28%,44.09%,38.14%,差异有统计学意义(P<0.05).通过倒置显微镜观察,重组人精氨酸酶作用U87细胞72 h后,0.2×10-2,1.6×10-2,1.25×10-1U·mL-1实验组的细胞密度随着药物浓度升高而显著降低,镜下可见U87细胞形态发生明显的变形,皱缩,坏死.Western blotting实验结果表明,U87细胞的ASS蛋白表达缺陷.当重组人精氨酸酶作用于U87细胞同时,补充部分L-精氨酸时的细胞活力为60.53%,未补充L-精氨酸组的细胞活力为47.48%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 由于人脑胶质瘤细胞U87细胞合成精氨酸的关键酶ASS蛋白表达缺陷,重组人精氨酸酶通过耗竭外源性精氨酸,对人脑胶质瘤细胞U87产生显著的杀伤效应.