绵羊肺炎支原体膜蛋白p74基因的克隆、分子特征及反应原性研究

• 作者: 乔军 卢海亭 孟庆玲 彭叶龙 才学鹏 田路路 贡莎莎 陈创夫 陈诚
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊肺炎支原体 p74基因 克隆 序列分析 原核表达 反应原性
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产
• 页码范围: 1222-1228
• 页数: 7页
• 分类号: S852
• 字数: 4437字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2017.5.041

摘要

[方法]利用PCR方法对绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)新疆分离株MO-XJ p74基因进行扩增、克隆及测序,分析其分子特征.将P74蛋白抗原集中区编码序列亚克隆至表达载体pET-32a(+),构建重组表达载体pET-32a(+)-p74C,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达.[结果]MO-XJ p74基因全长2016 bp,编码671个氨基酸;对编码的氨基酸序列分析发现,该蛋白不含信号肽序列,9 ～31位氨基酸序列含有1个跨膜区,有16个N-糖基化位点、7个N-酰基化位点、17个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及5个蛋白激酶C磷酸化位点.同源性分析显示MO-XJ P74蛋白氨基酸序列与标准株MO-SC01氨基酸序列同源率为86.5％,其羧基端为P74蛋白抗原集中区.SDS-PAGE检测结果显示,表达的P74蛋白抗原表位集中区片段对分子质量约为35.5 kDa,与理论值相符;Western blot分析表明重组P74蛋白具有较强的反应原性.[结论]本研究为进一步筛选MO亚单位疫苗及血清学诊断的候选抗原奠定了前期基础.