长链非编码RNA lnc-GCLC-1稳定沉默的肝细胞株L02的构建与验证

• 作者: 农清清 廖娟 朱雪凤 李江恒 胡新梅 范誉 费梦雪 贾雪姣 马智星 黄秋月
• 来源期刊: 环境与健康杂志
• 学科: 医学
• 关键词: lnc-GCLC-1 沉默 L02细胞 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 基础与应用
• 页码范围: 1075-1079,封3
• 页数: 6页
• 分类号: R994.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16241/j.cnki.1001-5914.2017.12.010

摘要

目的 利用慢病毒载体构建长链非编码RNA lnc-GCLC-1沉默的稳转L02肝细胞株,为研究lnc-GCLC-1功能提供基础.方法 以lnc-GCLC-1为靶点,设计并合成4组双链发卡结构,分别与慢病毒载体psi-LVRH 1GP连接构成重组质粒;转化感受态细胞获取大量重组质粒后电泳、测序鉴定;通过瞬时转染筛选出2个有效的短发卡RNA(shRNA);将重组质粒转染293T细胞后,收集病毒液并感染L02细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株.利用荧光显微镜观察细胞绿色荧光情况以检测转染效果,采用Real-time PCR鉴定转染细胞株,并检测lnc-GCLC-1沉默对GCLC mRNA表达的影响.结果 电泳及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功;shRNA-2和shRNA-4是有效的shRNA;用0.5 μg/ml嘌呤霉素成功筛选出稳定低表达L02细胞株;在shRNA-2和shRNA-4稳定转染L02细胞株中,lnc-GCLC-1的表达水平均低于阴性载体组(P＜0.05),沉默效率分别为21.3％和64.82％;shRNA-2组和shRNA-4组GCLC的mRNA表达量均低于阴性载体组(P＜0.01).结论 本研究成功构建了lnc-GCLC-1沉默稳转L02细胞株.