ShRNA靶向沉默VTCN1基因对鼻咽癌细胞的影响

• 作者: 周绪红 宋鹏 尹述成 彭涛 董洁
• 来源期刊: 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽癌 RNA干扰 VTCN1 细胞增殖与侵袭 JAK/STAT信号通路
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 论著——研究报告
• 页码范围: 797-801
• 页数: 5页
• 分类号: R762
• 语种: 中文
• DOI: 10.13201/j.issn.1001-1781.2017.10.015

摘要

目的:通过研究VTCN1在鼻咽癌细胞中的表达情况,采用慢病毒载体靶向沉默VTCN1基因体外对人鼻咽癌细胞的抑制作用.方法:通过RT-PCR技术和蛋白质免疫印迹法,检测人鼻咽癌细胞株CNE1,HONE-1,NP65和HNE2的VTCN1表达情况,筛选出VTCN1表达量最多的细胞株,进行后续的实验.用脂质体lipofectamine2000将沉默VTCN1的慢病毒载体转染高表达VTCN1的HNE2细胞,筛选出稳定细胞株;采用RT-PCR技术和蛋白质免疫印迹法检测VTCN1 ShRNA对VTCN1基因的靶向沉默效率;ckk-8、基质胶侵袭实验检测VTCN1沉默后HNE2细胞增殖和侵袭的影响;蛋白质免疫印迹实验检测VTCN1沉默后,JAK/STAT通路主要蛋白的磷酸化水平的变化.结果:VTCN1靶向沉默的细胞VTCN1表达受到显著抑制;RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测发现稳定转染ShRNA后,VTCN1的mRNA表达水平和蛋白表达水平均明显下降(P＜0.05);转染VTCN1 ShRNA后HNE2细胞的增殖和侵袭能力均明显降低(P＜0.05);VTCN1沉默后,JAK、STAT磷酸化水平明显下降(P＜0.05).结论:VTCN1 ShRNA能有效沉默VTCN1的表达,显著抑制HNE2细胞的增殖和侵袭,推测其与下调JAK/STAT信号通路蛋白的活化相关.