家蚕CDK11与RNPS1和9G8相互作用的鉴定

• 作者: 刘太行 吴云飞 周亮 张倩 杨基贵 潘彩霞 潘敏慧 董小龙
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 家蚕 CDK11 RNPS1 9G8 pre-RNA剪接
• 年，卷（期）: 2017,（22）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 4398-4407
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.22.016

摘要

[目的]鉴定家蚕(Bombyx mori)CDK11与RNPS1和9G8的相互作用,为解析其是否参与前体RNA的剪接打下基础.[方法]利用家蚕基因组数据库SilkDB找到本研究克隆的家蚕基因序列,采用Primer 5.0进行引物设计,通过PCR技术克隆获得家蚕的两个重要剪接因子RNPS1和9G8,并构建具有不同抗原标签的过表达载体,采用NCBI检索并获得其他物种的相关序列,利用在线预测软件SMART进行结构域预测,采用ClustalX 1.83和GENEDOC 3.2预测同源序列,利用软件MEGA 6.0构建系统进化树,通过免疫荧光验证家蚕CDK11两种剪切体CDK11A和CDK11B分别与RNPS1和9G8的共定位情况,进一步通过免疫共沉淀验证CDK11A、CDK11B分别与RNPS1和9G8的相互作用.[结果]RNPS1的开放阅读框长为882 bp,编码293个氨基酸;9G8的开放阅读框长为531 bp,编码176个氨基酸;RNPS1和9G8都属于SR蛋白家族,具有该蛋白家族成员的一个富含丝氨酸/精氨酸(S/R)重复序列的RS结构域.同源序列比对表明,RNPS1和9G8都具有典型的RRM结构域,此外9G8还含有一个锌指结构域.系统进化分析显示,RNPS1聚类于无脊椎动物一支,与同为鳞翅目昆虫的斑点木蝶、黑脉金斑蝶等亲缘关系较近;9G8也聚类于无脊椎动物一支,与同为鳞翅目昆虫的黑脉金斑蝶、金凤蝶等关系较近.荧光共定位证明,RNPS1分别与CDK11A和CDK11B共定位于细胞核中,且具有点状共聚集现象;同时发现,RNPS1还具有胞质定位,点状聚集于核外周.而9G8分别与CDK11A、CDK11B在细胞核中也具有共定位现象.进一步通过免疫共沉淀发现,在所有的总蛋白和细胞裂解离心后的上清液样品中,均能检测到对应目的条带的表达,表明共转染的细胞均能正常表达目的蛋白,并且蛋白溶于上清.同时,在所有的共沉淀条带中,均能检测到对应目的条带,以上结果表明CDK11A、CDK11B均与RNPS1和9G8具有相互作用.[结论]家蚕RNPS1和9G8具有典型的RRM结构域,属于SR家族.CDK11A和CDK11B能够与RNPS1和9G8相互作用.