免疫共沉淀联合质谱分析筛选与HCMV IE86相互作用蛋白

• 作者: 李朝华 王斌 胡明 钱冬萌
• 来源期刊: 青岛大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 巨细胞病毒 即早蛋白质类 免疫沉淀法 质谱分析法 蛋白质相互作用
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5,9
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9|R392.33
• 语种: 中文
• DOI: 10.11712/jms201801001

摘要

目的 利用免疫共沉淀联合质谱分析的方法,在人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞和胶质瘤细胞系U87MG细胞中,筛选与人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IE86相互作用的病毒蛋白和剪接相关蛋白.方法 通过HCMV感染细胞使IE86蛋白在细胞中表达,采用免疫共沉淀的方法富集两种细胞系中的IE86结合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分离免疫共沉淀复合物,从胶中切取IE86结合蛋白条带,胶内酶解后进行液相色谱-质谱联用分析及数据库检索,筛选与IE86相互作用蛋白.结果 利用免疫共沉淀联合质谱分析,在MRC-5细胞中,共鉴定到与IE86相互作用的病毒编码的蛋白质17种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白25种;在U87MG细胞中,共鉴定到病毒编码的蛋白质4种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白8种.结论 与胶质瘤细胞系U87MG相比,人胚肺成纤维细胞MRC-5中有更多种病毒蛋白及剪接相关蛋白与IE86有相互作用,协同参与IE86的剪接及病毒早、晚期蛋白的表达,这为进一步研究HCMV在不同细胞环境中的复制机制提供了基础.