旋毛虫副肌球蛋白在BaculoDirect昆虫杆状病 毒表达系统中的表达及鉴定

• 作者: 王子霞 程喻力 诸欣平 赵夕 郝春悦 黄京京
• 来源期刊: 寄生虫与医学昆虫学报
• 关键词: 旋毛虫 副肌球蛋白 昆虫杆状病毒表达系统 表达和鉴定 抗原性
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 著述
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 字数: 4638字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2018.01.001

摘要

利用BaculoDirect昆虫杆状病毒表达系统表达重组旋毛虫副肌球蛋白(recombinant Trichinella spiralis paramyosin,rTsPmy),以获得生物学活性较好的重组蛋白.通过PCR和DNA重组方法构建含TsPmy基因的Gateway入门载体重组质粒pDONR221(pDONR221/TsPmy),经测序鉴定后,扩增重组质粒;利用重组质粒pDONR221/TsPmy和BaculoDirect线性杆状病毒进行Gateway DNA重组反应,构建重组病毒,用其直接感染昆虫细胞Sf9使得重组病毒具有感染活力;连续感染Sf9以扩增病毒,利用滴度较高的病毒感染Sf9进行rTsPmy表达;SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定表达的重组蛋白rTsPmy.结果显示,重组质粒经测序鉴定显示序列正确;SDS-PAGE及Western blotting显示rTsPmy分子量大小约110 kDa,未见不完全表达;可溶性分析显示rTsPmy部分可溶,大部分为不可溶沉淀;Western blotting结果显示rTsPmy可被旋毛虫感染的小鼠和猪抗血清识别,具有抗原特异性.本研究首次利用BaculoDirect昆虫杆状病毒表达系统成功表达了rTsPmy,获得翻译后修饰更加完善、 纯化效果更好的重组蛋白,对于进一步研究TsPmy的功能,为制备有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子提供了生物学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	诸欣平	首都医科大学基础医学院病原生物学系	69	408	11.0	16.0
2	黄京京	首都医科大学基础医学院病原生物学系	6	3	1.0	1.0
3	程喻力	首都医科大学基础医学院病原生物学系	8	11	2.0	3.0
4	赵夕	首都医科大学基础医学院病原生物学系	2	2	1.0	1.0
5	王子霞	首都医科大学基础医学院病原生物学系	1	2	1.0	1.0
6	郝春悦	首都医科大学基础医学院病原生物学系	1	2	1.0	1.0