抗CD147人源单链抗体的筛选及生物特性初步鉴定

• 作者: 丁立 付凯飞 刘妍 周丽君 王欲晓 陈秀秀
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示技术 CD147 单链噬菌体抗体
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 59-64
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11|R392-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20180009

摘要

目的 利用噬菌体展示技术筛选特异性抗CD147人源单链抗体(human anti-CD147 scFvs)并进行生物特性鉴定.方法 以真核表达的CD147蛋白为抗原,采用“酸洗脱法”对库进行4轮富集性筛选、以ELISA法对筛选克隆的结合活性进行测定,以竞争ELISA和Western blot实验对获得的噬菌体抗体和可溶性scFv的特异性进行鉴定,通过DNA测序核实特异性scFvs的人源性及其亚群,以硫氰酸盐洗脱法对获得的抗体进行相对亲和力分析.结果 经过4轮的富集性筛选,共筛出4个与CD147特异性结合的阳性克隆,其中3个获得可溶性表达,竞争抑制及Western blot实验证实其能与CD147特异性结合.DNA序列分析证实3个阳性克隆具有不同的基因型,三者的轻链可变区分别属于VλⅠ、VκⅡ、VλⅢ亚群,重链可变区分别属于VHⅠ、VHⅢ、VHⅢ亚群.硫氰酸盐洗脱法测出13号、15号和168号3个human anti-CD147 scFvs的亲和力分别为0.20 mol/、0.35 mol/L和0.6 mol/L.结论 成功从大容量噬菌体抗体库中筛选到特异性human anti-CD147 scFvs,为进一步研究该抗体的功能及应用前景奠定了基础.