一种简单的gRNA体外筛选方法

• 作者: 于清清 刘恩岐 刘懿 徐丽然 成大欣 王晓靖 赵四海 高守翠
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 引导核糖核酸(gRNA) 体外筛选 基因编辑
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 126-129
• 页数: 4页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 2527字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.02.009

摘要

目的 探讨体外筛选效率较高的引导核糖核酸(guide ribonucleic acid,gRNA)的方法.方法 以家兔扭转蛋白2A(torsin family 2 member A,TOR2A)基因的gRNA设计和筛选为例,介绍gRNA简单的体外筛选方法.首先根据TOR2A基因的外显子序列在线设计gRNA,选择3条gRNA序列(也可更多),将其分别插入到T7启动子之后,体外转录gRNA并纯化备用.设计包含gRNA打靶序列的一对引物,以基因组DNA为模板进行PCR扩增并胶回收PCR产物.将gRNA,PCR产物和Cas9内切酶组成的体系进行酶切实验,琼脂糖电泳判定gRNA引导的酶切效率.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示第1条gRNA未能引导Cas9内切酶对含打靶位点的PCR产物进行DNA酶切,第2条gRNA(GCTTGTCCATCTCGTCGAAG)和第3条gRNA(TCTCTTCCTCTTCGACGAGA)引导Cas9进行了比较彻底的酶切,第2、3条gRNA可用于后续研究.结论 此体外筛选方法是一种简单、可行和实用的gRNA的体外筛选策略.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成大欣	陕西省人民医院新生儿科	7	40	4.0	6.0
5	徐丽然	陕西省人民医院新生儿科	1	2	1.0	1.0
6	于清清	陕西省人民医院新生儿科	1	2	1.0	1.0
7	高守翠	陕西省人民医院新生儿科	1	2	1.0	1.0
8	王晓靖	陕西省人民医院新生儿科	1	2	1.0	1.0
9	刘懿	陕西省人民医院新生儿科	1	2	1.0	1.0
10	刘恩岐	陕西省人民医院新生儿科	1	2	1.0	1.0
11	赵四海	陕西省人民医院新生儿科	1	2	1.0	1.0