人脐带间充质干细胞外泌体抑制草酸及草酸钙诱导的HK-2细胞上皮间质转化

• 作者: 何大维 唐波 张丹 李典 沈炼桔 郭文浩 魏光辉
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 人脐带间充质干细胞 外泌体 肾小管上皮细胞 上皮间质转化 一水草酸钙
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 913-920
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2018.06.0329

摘要

采用草酸及一水草酸钙(calcium oxalate monohydrate,COM)晶体诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)发生上皮间质转化,同时采用超速离心法提取人脐带间充质干细胞外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cells exosome,hucMSC-Ex)用于干预间质化的HK-2细胞,探究外泌体对其纤维化的缓解作用.采用Western blot、透射电镜及NTA(nanoparticle tracking analysis)鉴定外泌体表面标志物及形态,采用MTT法观察外泌体对细胞活性的影响;免疫荧光双标法检测ZO-1及N-cadherin的表达;Western blot检测细胞上皮标志物E-cadherin和ZO-1、间质标志物N-Cadherin和α-SMA及相关信号通路蛋白TGF-β和Smad2的表达水平.结果显示,草酸和COM晶体可使K-2细胞形态发生上皮间质转化,并降低上皮细胞标志物E-cadherin和ZO-1的表达,同时使HK-2细胞高表达间质标志物N-Cadherin和α-SMA并上调信号通路蛋白TGF-β和Smad2的表达.电镜下可观察到hucMSC-Ex形态呈双层膜,中空,圆形或椭圆形,并且阳性表达外泌体标志物Alix、CD63和TSG101蛋白,其粒径分布在80～300 nm之间.hucMSC-Ex预处理可显著提高暴露于草酸及COM晶体的HK-2细胞活性.降低HK-2细胞中N-Cadherin和α-SMA及信号通路蛋白TGF-β和Smad2的表达,恢复其上皮标志物E-cadherin和ZO-1蛋白的表达.该研究结果表明,hucMSC-Ex能够缓解草酸及COM晶体诱导的HK-2细胞损伤,同时抑制其上皮间质转化.