摘要:
目的 探索长链非编码RNA-MGC (lnc-MGC)在高糖诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)转分化中的作用.方法 使用永生化的HPMCs,设置对照组及高糖组,对照组给予常规培养基培养,高糖组给予含60mmol/L葡萄糖的常规培养液培养72h.采用Real-time PCR检测两组lnc-MGC的表达变化,并采用Real-time PCR及Western bloting检测两组上皮细胞E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、I型胶原蛋白(COL-1)和Ⅲ型胶原蛋白(COL-3)mRNA及蛋白表达的变化.采用慢病毒转染HPMCs,上调和下调lnc-MGC后,分别观察上述指标的变化.结果 高糖刺激HPMCs 72h后,Real-time PCR检测结果显示:与对照组相比,高糖组lnc-MGC及αt-SMA、CTGF、COL-1、COL-3 mRNA表达水平均明显增加(P<0.05),E-Cadherin mRNA表达水平明显降低(P<0.05);Westernblotting检测结果显示其蛋白表达与mRNA表达变化趋势一致,差异均有统计学意义(P<0.05).此外,Real-time PCR检测结果还显示,与对照组相比,慢病毒转染下调lnc-MGC后,lnc-MGC、α-SMA、CTGF、COL-1、COL-3的表达明显降低(P<0.05),E-Cadherin的表达明显升高(P<0.05);Western blotting检测结果显示其蛋白表达与mRNA表达变化趋势一致,差异均有统计学意义(P<0.05).而慢病毒转染上调lnc-MGC后,Real-time PCR检测结果显示,与对照组相比,lnc-MGC、α-SMA、CTGF、COL-1、COL-3的表达增加(P<0.05),E-Cadherin的表达降低(P<0.05);Western blotting检测结果显示其蛋白表达与mRNA表达变化趋势一致,差异均有统计学意义(P<0.05).采用miRBase数据库预测所得lncRNA下游靶分子为miRNA126-3p,与对照组相比,高糖刺激后miRNA126-3p表达明显升高(p<0.05),转染下调lnc-MGC的慢病毒后miRNA126-3p表达明显降低(P<0.05),转染上调lnc-MGC的慢病毒后miRNA126-3p表达明显升高(P<0.05).结论 lnc-MGC通过调控miRNA126-3p参与HPMCs的转分化过程,调控lnc-MGC的表达可以改变HPMCs的表型转换,并有可能延缓腹膜纤维化的发展.