线粒体内膜蛋白表达对肝癌细胞生物学作用研究

• 作者: 王佩佩 王道月 缪琳 轩菡 陈振东
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 线粒体内膜蛋白 Mic19 Mic60 增殖 迁移 侵袭
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究/论著
• 页码范围: 849-857
• 页数: 9页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文

摘要

目的 线粒体的功能取决于线粒体的膜系统,而线粒体内膜的形态由近期发现的线粒体接触位点复合物(mitochondrial contact site and crista organizing system,MICOS)所调节,MICOS复合物的突变可改变嵴的形成,导致线粒体功能障碍.本研究采用慢病毒shRNA靶向敲低MICOS复合物亚基蛋白-线粒体内膜蛋白Mic19及Mic60表达,并研究敲低Mic19和Mic60对肝癌细胞生物学作用的影响.方法 根据NCBI中的序列设计、构建并包装敲低Mic19及Mic60的重组慢病毒,收集被病毒上清感染后经嘌呤霉素筛选得到的肝癌HepG2阳性细胞,并以空白组、空载pLKO.1慢病毒质粒组作为对照.采用蛋白印迹法检测Mic19及Mic60蛋白的表达,以筛选敲低效率最高的稳定细胞株.采用MTT法、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,观察敲低Mic19及Mic60蛋白表达对肝癌细胞生物学行为的影响.结果 Mic19敲低组中蛋白相对表达量shRNA Mic19-1 (0.579±0.042)和shRNA Mic19-2(0.524±0.111)均低于空白组(1.065±0.105)或空载组(1.07±0.092),差异有统计学意义,均P＜0.01.Mic60敲低组蛋白相对表达量shRNA Mic60-1(0.172±0.107)、shRNA Mic60-2(0.269±0.027)明显低于空白组(1.065±0.105)或空载组(1.07±0.092),差异有统计学意义,均P＜0.01.生长曲线表明,Mic19敲低组至感染第36h时的吸光度(A)值低于对照组,均P＜0.05;Mic60敲低组至感染第12h时的A值显著低于对照组,P＜0.01.划痕实验表明,至第48 h Mic19敲低组细胞迁移距离为(286.8±38.97) μm,Mic60敲低组细胞迁移距离为(214.6±41.64) μm,与空白组(500.8±25.6) μm或空载组(487.3±31.37) μm相比差异均有统计学意义,均P＜0.01.在不铺胶的Transwell迁移实验中,Mic19敲低组穿膜细胞数为(440.4±65.35)个/低倍视野,Mic60敲低组穿膜细胞数为(235.2±21.3)个/低倍视野,均少于空白组(574.8±36.4)或空载组(574±53.95)个/低倍视野,均P＜0.01.在铺胶的侵袭实验中,Mic19敲低组穿膜细胞数为(172.4±15.5)个/低倍视野,Mic60敲低组穿膜细胞数为(118.2±25.53)个/低倍视野,均少于对照组空白组(238.6±22.85)或空载组(227.8±22.27)个/低倍视野,差异有统计学意义,均P＜0.01.结论 重组慢病毒shRNA Mic19-2、shRNA Mic60 1可分别有效敲低HepG2细胞Mic19、Mic60的表达.慢病毒shRNA靶向敲低Mic19及Mic60表达可抑制肝癌HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并为后续进一步研究线粒体内膜蛋白(Mic19、Mic60)对肝癌细胞发生发展的影响提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈振东	安徽医科大学第二附属医院肿瘤科	146	848	15.0	19.0
2	轩菡	安徽医科大学第二附属医院肿瘤科	17	80	5.0	8.0
3	缪琳	安徽医科大学第二附属医院肿瘤科	4	6	1.0	2.0
4	王佩佩	安徽医科大学第二附属医院肿瘤科	2	0	0.0	0.0
5	王道月	安徽医科大学第二附属医院肿瘤科	2	0	0.0	0.0