猪流行性腹泻病毒黑龙江分离株ORF3基因的克隆、表达及分子进化分析

• 作者: 张华 张雅婷 徐嘉欣 曹宏伟 李兴志 武雪宁 程丽鑫 邹德华 郑亮
• 来源期刊: 黑龙江八一农垦大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: PEDV ORF3蛋白 载体构建 表达定位 进化分析
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 52-58
• 页数: 7页
• 分类号: Q93
• 字数: 5387字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2090.2018.03.010

摘要

克隆2017年黑龙江省大庆地区流行PEDV毒株(HLJ/DQ/2017)ORF3基因,通过真核表达及分子进化分析方法,为研究ORF3蛋白生物学功能提供重要的实验基础.TRIzol裂解法提取病毒RNA,RT-PCR技术扩增ORF3基因片段并测序,克隆至pEGFP-N1载体上,转染至HeLa细胞.应用DNAStar、DNAMAN、MEGA5.0软件进行序列比对和发育树绘制,应用Western Blot技术、Immunofluorescence技术检测ORF3蛋白的表达和细胞定位.经过酶切和测序验证pEGFP-N1载体中正确插入了ORF3基因,Western Blot法、Immunofluorescence法证实ORF3-EGFP融合蛋白聚集成核表达在HeLa细胞质的局部,由进化树分析显示,该毒株和2015年黑龙江地区流行的两个株毒株(HLJ/2015/116、HLJ/2015/DP1-1)位于同一群,但相比2011年黑龙江地区爆发的毒株(CH/HLJ/HH-2/2011),前者亲缘关系更近一些.融合蛋白ORF3-EGFP在HeLa细胞中聚集成核表达,遗传进化分析表明,该毒株与2015年黑龙江省流行的PEDV毒株相比无较大变异,且为目前世界最为流行的PEDV毒株类型.