禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因壳聚糖纳米DNA疫苗的制备与检测

• 作者: 孔梁宇 宫强 牛明福
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽多杀性巴氏杆菌 ptfa基因 壳聚糖 纳米DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 491-495
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.03.11

摘要

为制备禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因壳聚糖纳米DNA疫苗,PCR扩增获得ptfa基因片段,克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+)中构建重组质粒,以复凝聚法制备ptfa基因的壳聚糖纳米DNA疫苗.通过凝胶阻滞试验确定壳聚糖与DNA分子完全结合时的N/P比值;测定纳米DNA疫苗的包封率;透射电镜观察纳米DNA疫苗的形态;同时检测其抗DNA酶降解的能力及稳定性.结果成功构建禽多杀性巴氏杆菌ptfa基因的裸DNA疫苗并制备出纳米DNA疫苗,该纳米DNA疫苗的N/P比值为2.5,包封率为95.3％,经电镜观察显示其形态大多呈规则的球状,粒径为200 nm左右,且具有较好的稳定性,可有效抵抗DNA酶Ⅰ的降解.从而为进一步研究其免疫保护效果奠定了一定的基础.