犬细小病毒可视化LAMP检测方法的建立

• 作者: 何景龙 廖翔 李洪波
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 犬细小病毒 环介导等温扩增 中性红 可视化
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 677-682
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 3047字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.05.016

摘要

目的:建立犬细小病毒(CPV)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法.方法:比对77个不同犬细小病毒全基因组数据,从中找出一段433 bp的高度保守序列作为检测对象,通过基因合成得到含该序列的质粒,制备1×103、1×102、1×101拷贝/μL的质粒作为标准品,并设计一套能扩增这段序列的LAMP引物.结果:首先采用实时荧光定量LAMP扩增,确定了设计的引物能够扩增质粒标准品,最低检测浓度为1×101拷贝/μL;然后用pH敏感指示剂中性红进行可视化LAMP扩增检测,肉眼观察到扩增反应液变为紫红色即判断为阳性,最低检测浓度同样为1×101拷贝/μL;随后采用实时荧光定量LAMP和可视化LAMP测试50份犬细小病毒疑似临床DNA样品,检测出阳性样品35个,与国标诊断结果完全吻合;将阳性样品扩增后测序,经比对,确定为犬细小病毒序列;对金黄色葡萄球菌、宋内志贺菌、坂崎肠杆菌、单增李斯特菌、大肠杆菌DNA进行扩增,结果均为阴性,证明了该方法的特异性.结论:建立了高度特异和灵敏的犬细小病毒可视化LAMP检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖翔		1	0	0.0	0.0
2	何景龙		1	0	0.0	0.0
3	李洪波		1	0	0.0	0.0