屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性鉴定

• 作者: 关律昕 刘志刚 刘晓宇 常可欣 杨礼腾 陈德盛 黄娜娜
• 来源期刊: 南昌大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 屋尘螨 Derp7基因 表达 纯化 过敏原性
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 5-10
• 页数: 6页
• 分类号: R392.8
• 字数: 3725字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13764/j.cnki.ncdm.2018.06.002

摘要

目的 探讨屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性分析.方法 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增屋尘螨Der p7基因,经酶切、连接后转化大肠杆菌,挑取阳性单克隆菌落,扩增培养后测序鉴定正确后大量表达;采用亲和层析法纯化表达产物,免疫印迹(Western blot)法鉴定其过敏原性;生物信息学方法分析其基因的同源性.结果 RT-PCR显示Der p7基因片段大小约700 bp;大量表达后进行的SDS-PAGE电泳分析显示,Der p7蛋白表达于沉淀物中,以包涵体蛋白为主,分子质量约39 kDa.Western blot显示该重组基因所表达的蛋白可与尘螨过敏患者的血清起反应,表明该重组蛋白具有过敏原性.生物信息学分析显示克隆的Der p7基因与Der f7基因的同源性约79.14％.结论 本实验成功获得大量表达及纯化后具有过敏原性的Der p7蛋白,对临床上完善对过敏性疾病的检测与治疗具有积极的意义.