牛奶主要过敏原αs1-酪蛋白全长与片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

• 作者: 刘志刚 曹燕娟 罗新萍 胡东生 陈思 黄钟
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 牛奶过敏原 αs1-酪蛋白 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 页码范围: 601-605
• 分类号: R392.8
• 字数: 4623字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.07.006

摘要

目的:克隆并表达牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的全长及N端、C端两个片段区基因,用于筛选与制备牛奶主要过敏原的单克隆抗体.方法:利用RT-PCR技术克隆αs1-酪蛋白基因,测序后将目的片段克隆入原核表达质粒pET载体,转化至大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3).经IPTG诱导表达,获得重组αs1-酪蛋白.用Ni2+亲和层析柱纯化,用 Western blot和ELISA检测重组蛋白与牛奶过敏患者血清IgE的结合活性.结果:克隆获得αs1-酪蛋白全长的开放阅读框基因为645 bp(含终止密码子),编码214个氨基酸.N、C端片段区基因(含终止密码子)分别为285、294 bp,编码94、97个氨基酸.三种重组蛋白均能以可溶性表达形式纯化,经Western blot和ELISA检测都具有较好的免疫原性,而αs1-酪蛋白全长的免疫原性更强.结论:成功地克隆和表达了αs1-酪蛋白全长及N、C端两个片段区基因,为研制牛奶主要过敏原的单克隆抗体,制备牛奶主要过敏原的检测试剂奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志刚	深圳大学医学院	324	1724	17.0	23.0
2	胡东生	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室和深圳大学医学院	49	444	12.0	17.0
3	陈思	深圳大学医学院	11	33	4.0	5.0
4	曹燕娟	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室和深圳大学医学院	1	10	1.0	1.0
5	罗新萍	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室	1	10	1.0	1.0
6	黄钟	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室	1	10	1.0	1.0