X射线衍射晶体法解析脱卤酶DehDIV-R结构的研究

• 作者: 吴坚平 徐刚 杨立荣 童超迪
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: R-2-卤代酸脱卤酶 纯化 结晶 X射线衍射
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 19-25
• 页数: 7页
• 分类号: Q814
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20180803

摘要

R-2-卤代酸脱卤酶能立体选择性水解R-2-卤代酸.解析酶的单晶结构对提高酶的选择性和活性提供了直接的结构指导,是目前酶结构领域研究的前沿.以实验室前期得到的来自假单胞菌ZJU26的R-2-氯丙酸脱卤酶(DehDIV-R)为研究对象,采用X射线衍射晶体法进行结构解析.采用ppSUMO载体融合表达DehDIV-R蛋白,依次通过Ni-NTA亲和层析、透析酶切、二次Ni-NTA亲和层析以及凝胶过滤层析纯化得到单一条带,且均一性好的蛋白.接着对结晶条件进行初筛与优化,得到的最佳结晶条件为0.1 mol/L HEPES pH 7,12％ PEG 6 000,0.2mol/L MgCl2,8mmol/L CHAPS.晶体在上海同步辐射光源BL18U1线站上收集衍射数据,采用分子置换法成功解析获得了分辨率为2.35(A)的DehDIV-R的晶体结构.Ramachandran图表明98.02％的氨基酸位于最适区,证明了该结构的合理性.DehDIV-R的纯化、结晶以及结构解析为进一步深入了解其结构和功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨立荣	浙江大学化学工程与生物工程学院	117	903	14.0	25.0
2	徐刚	浙江大学化学工程与生物工程学院	84	500	11.0	17.0
3	吴坚平	浙江大学化学工程与生物工程学院	99	759	12.0	23.0
4	童超迪	浙江大学化学工程与生物工程学院	1	2	1.0	1.0