PADI4-siRNA-MSN的构建及其在RA防治中的初步应用

• 作者: 宗明 成宇 范列英 陈赛阁
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 类风湿关节炎成纤维滑膜细胞 介孔二氧化硅纳米载体 小分子干扰 细胞凋亡 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1515-1520
• 页数: 6页
• 分类号: R593.22
• 字数: 5139字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2018.10.016

摘要

目的:制备介孔二氧化硅纳米载体(MSN)并包载肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)小干扰RNA(PADI4-siRNA-MSN),阐明PADI4-siRNA-MSN对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响.方法:采用模板法合成MSN,包被阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)及荧光标记分子罗丹明B(RhB),检测其表征,包括粒径、Zeta电势、荧光和形貌.设计并合成2对FAM标记的针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链(si-944、si-1225)及阴性对照si-NC,制备PADI4-siRNA-MSN和si-NC-MSN,转染RA-FLS,流式细胞术(FCM)鉴定转染率.采用荧光定量PCR、蛋白印迹技术检测转染48 h后,干扰组和阴性对照组细胞PADI4表达量,FCM检测细胞凋亡率,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察PADI4-siRNA-MSN胞内分布.所有数据采用配对t检验进行分析.结果:MSN经表征检测显示已成功制备并包被RhB、PEI,FCM结果显示转染率为93.3％(si-944)和91.9％(si-1225).si-NC组中的PADI4 mRNA水平为1.23±0.27;si-944、si-1225干扰组中分别为0.35±0.12、0.44±0.12,均显著低于阴性对照组(P<0.05).蛋白印迹结果与PCR结果一致.与si-NC组细胞凋亡率(8.83±0.15)相比,si-944和si-1225组细胞凋亡率(11.72±0.82,13.00±1.42)显著增加(P<0.05).CLSM结果显示PADI4-siRNA-MSN分布于核周.结论:PADI4-siRNA-MSN成功制备,并转染RA-FLS,有效沉默PADI4基因,显著增加RA-FLS的凋亡率.PADI4-siRNA-MSN在抑制RA-FLS增殖、促进凋亡中具有一定的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宗明	同济大学附属东方医院检验科	24	112	6.0	9.0
2	范列英	同济大学附属东方医院检验科	59	320	11.0	15.0
3	陈赛阁	同济大学附属东方医院检验科	1	0	0.0	0.0
4	成宇	同济大学附属东方医院检验科	4	0	0.0	0.0