人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用

• 作者: 任哲 张佩琢 张春龙 张美英 朱钦昌 李久香 杨志荣 王一飞 胡巢凤 陆大祥
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 疱疹病毒Ⅰ型,人 基因,UL40 siRNA
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2444-2447
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2145字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.12.035

摘要

目的:快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA,为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础.方法:应用RT-PCR扩增人HSV-1 F株UL40基因,将其连接到pEGFP-M构建pEGFP-M-UL40融合蛋白表达质粒.将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质粒共转染Vero细胞,通过观察绿色荧光蛋白报告基因的表达筛选高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA.结果:倒置荧光显微镜观察发现设计的4对siRNA中siRNA3和siRNA4能明显降低绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪检测证明siRNA3和siRNA4对目的基因沉默效率分别达到76.99%和84.00%.结论:成功构建了人HSV-1 UL40基因融合表达载体pEGFP-N1-UL40,并利用该载体筛选出2对高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA.