单个淋巴细胞的手工显微分离与单细胞RT-PCR研究

• 作者: 张丹 张文峰 徐鹏程 杨宇鹏 瞿创 蔡锐钿 邵红伟 陈昭 黄洁嫦
• 来源期刊: 广东药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 淋巴细胞 手工显微分离 单细胞RT-PCR
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 85-89
• 页数: 5页
• 分类号: Q2-33
• 字数: 3904字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2017111402

摘要

目的 建立单个T淋巴细胞的手工显微分离与目的基因扩增方法,为基于单个T淋巴细胞的相关研究奠定基础.方法 利用倒置显微镜和自制玻璃毛细管对T淋巴细胞进行手工单细胞显微分离,并针对T淋巴细胞个体小、胞质少的特点优化反转录与PCR条件,实现单个T淋巴细胞水平的反转录与目的基因扩增.结果 有效地对单个T淋巴细胞进行了手工显微分离,优化了单细胞的反转录和PCR条件,成功扩增出看家基因和多个特定目的基因,在此基础上又对TCR基因进行了扩增.结论 所建立并优化的手工显微单细胞分离技术与单细胞RT-PCR技术能有效地从单个T淋巴细胞中扩增目的基因,为今后基于单细胞水平研究高度异质性T细胞的功能、特性奠定了基础.