单细胞二重巢式PCR扩增影响因素初探

• 作者: 卢光琇 李麓芸 林戈 钟昌高 陆长富
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 聚合酶链反应 植入前诊断 β地中海贫血
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 58-63
• 页数: 6页
• 分类号: R714.55
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-167X.2005.01.014

摘要

目的: 对影响单细胞二重巢式PCR扩增的因素进行初步探讨.方法:针对β-珠蛋白基因CD41-42、IVS-Ⅱ654突变位点区域采用二重巢式PCR,分别以不同的引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液、PCR反应前采用或不采用98 ℃预变性扩增单个淋巴细胞和/或单卵裂球,了解这些因素对PCR扩增效率的影响.结果: 不同的引物浓度组中,终浓度为0.25 μmol/L R1+F1引物对与 0.3 μmol/L R2+F2引物对配对扩增效率最高;不同的Taq DNA聚合酶中TaKaRa EX Taq的扩增效率最高;中和缓冲液-1(200 mmol/L Tricine)的扩增效率显著高于中和缓冲液-2(900 mmol/L Tris·HCl, pH 8.3/300 mmol/L KCl/200 mmol/L HCl)的扩增效率(P<0.05);单细胞PCR反应前采用98 ℃预变性与不采用98 ℃预变性的扩增效率间差异无统计学意义.结论:不同引物浓度组合、不同的Taq DNA聚合酶、不同的中和缓冲液对单细胞的二重巢式PCR的扩增效率存在明显差异,而PCR反应前采用98 ℃预变性不能提高PCR扩增效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李麓芸		5	21	4.0	4.0
2	卢光琇		52	464	13.0	19.0
3	林戈		15	77	5.0	8.0
4	陆长富		6	7	2.0	2.0
5	钟昌高		1	4	1.0	1.0