外泌体源性miR-124对创伤性脑损伤急性期小胶质细胞活化状态的作用研究

• 作者: 叶玉勤 孔垂广 张欣 杨永祥 白威 苏鑫洪 贺晓生
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 外泌体 微小RNA-124 创伤性脑损伤 小胶质细胞 细胞活化
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1189-1194
• 页数: 6页
• 分类号: R651.1+5
• 字数: 5137字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2018.12.001

摘要

目的 探讨外泌体源性微小RNA(miR)-124对创伤性脑损伤(TBI)大鼠急性期损伤区脑组织中小胶质细胞活化状态的作用,为TBI后神经炎症的干预提供实验依据.方法 (1)将体外培养的HEK293细胞分为miR-124转染组和对照组,分别转染载有miR-124的质粒和空质粒,2～3周后分离出单克隆细胞系,继续培养2周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测2组细胞miR-124的含量;应用美国系统生物科技(SBI)试剂盒从2组细胞上清液中提取外泌体,电镜下观察外泌体的形态,应用Western blotting检测2组外泌体表面标记分子CD63的表达,RT-PCR检测2组外泌体内miR-124的含量.(2)60只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(n=12)、TBI组(n=24)和外泌体组(n=24),后2组大鼠应用控制性皮层撞击(CCl)法建立TBI模型.造模后24 h,外泌体组大鼠通过尾静脉注入外泌体(3×109个微粒),假手术组和TBI组大鼠注入等量溶剂.造模后3 d,应用RT-PCR检测3组大鼠损伤区脑组织miR-124的表达,流式细胞术(FCM)检测脑组织Iba-1+/CD32+和Iba-1+/CD206+小胶质细胞所占百分比,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测脑组织促炎因子白介素(IL)-1、IL-6和抑炎因子IL-4、IL-10的表达.结果 (1)RT-PCR检测显示miR-124转染组细胞miR-124的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).电镜下显示有直径约100 nm的球形微小颗粒,并有明显的膜性结构;Western blotting检测显示miR-124转染组外泌体表面标记分子CD63的表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测显示miR-124转染组外泌体miR-124的含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).(2)外泌体组大鼠损伤脑组织中miR-124的表达高于TBI组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.05).与假手术组比较,TBI组大鼠损伤脑组织Iba-1+/CD32+和Iba-1+/CD206+小胶质细胞所占百分比增加、IL-1、IL-6和IL-4、IL-10的浓度增加,差异有统计学意义(P<0.05);与TBI组比较,外泌体组大鼠损伤脑组织中Iba-1+/CD32+小胶质细胞所占百分比降低,Iba-1+/CD206+小胶质细胞所占百分比增高,IL-1、IL-6的浓度降低,IL-4、IL-10的浓度增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 外泌体源性miR-124可以促进TBI急性期损伤脑组织中小胶质细胞由M1型向M2型转化,从而减轻TBI的神经炎症.