卵泡液中游离线粒体DNA提取和定量方法的研究

• 作者: 刘宇 张玲 张衷源 李娇 汪文诤 赵雪 邵淑敏 邹敏
• 来源期刊: 生殖医学杂志
• 关键词: 游离线粒体DNA 两步离心法 冷冻 Q PCR 卵泡液
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 技术交流
• 页码范围: 1136-1141
• 页数: 6页
• 字数: 3674字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3845.2018.11.017

摘要

目的 探讨影响卵泡液中游离线粒体DNA(cfmtDNA)提取和定量的因素即卵泡液处理和冷冻储存、实时荧光定量PCR(Q-PCR)引物和试剂盒选择. 方法 收集2016年3月～10月在华中科技大学同济医学院生殖医学中心进行IVF/ICSI的78名患者的卵泡液样本,分别用4种方法(一步离心法、两步离心法、两步离心法的基础上0.22 μm及0.45 μm过滤器过滤)对样本进行处理.处理后的样本一部分继续后续操作,一部分冷冻储存后再进行相应实验.用硅胶膜离心柱法,(如TIANamp Genomic DNA试剂盒)和磁珠法(如BeaverBeadsTM Circulating DNA试剂盒)分别提取样本DNA,进行Q PCR,比较线粒体编码的基因ND1和hmito3为引物cfmtDNA定量的差异及相关性. 结果 一步离心法获得的cfmtD-NA浓度显著高于其余三种方法(P＜0.05),其余三种方法之间浓度无显著性差异(P＞0.05);与冷冻前相比,冷冻后cfmtD-NA浓度无显著性差异(P＞0.05);ND1引物扩增cfmtDNA所得的浓度平均值显著高于hmito3引物扩增cfmtDNA所得的浓度平均值(P＜0.05),ND1引物和hmito3引物扩增cfmtDNA所得的浓度显著相关(r=0.63,P＜0.000 1);与TIANampGenomic DNA试剂盒相比较,BeaverBeadsTM Circulating DNA试剂盒提取cfmtDNA的量显著增加(P＜0.05). 结论 卵泡液样本的处理方法、引物和试剂盒的选择都会影响卵泡液中cfmtDNA的定量.建议选用两步离心法处理卵泡液,磁珠法提取游离DNA,ND1引物进行cfmtDNA的定量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘宇	华中科技大学同济医学院计划生育研究所	51	201	8.0	11.0
2	邹敏	华中科技大学同济医学院生殖医学中心	12	110	6.0	10.0
3	汪文诤	华中科技大学同济医学院生殖医学中心	2	5	1.0	2.0
4	赵雪	华中科技大学同济医学院计划生育研究所	3	3	1.0	1.0
5	邵淑敏	华中科技大学同济医学院生殖医学中心	5	14	2.0	3.0
6	李娇	华中科技大学同济医学院生殖医学中心	1	0	0.0	0.0
7	张衷源	华中科技大学同济医学院生殖医学中心	1	0	0.0	0.0