联合应用软骨再生支架与突变型HIF-1α修饰BMSCs分泌的外泌体对晚期软骨缺损修复的促进作用

• 作者: 刘丹平 周山健 李海乐 田大川 綦惠 肖大伟 苏永蔚
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 软骨再生支架 骨髓间充质干细胞 外泌体 软骨缺损 软骨细胞 白细胞介素1β
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 216-222,封2
• 页数: 8页
• 分类号: R684
• 字数: 6547字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20180203

摘要

目的:探讨突变型低氧诱导因子1α(HIF-1α)修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的外泌体对软骨细胞的保护作用,阐明其联合软骨再生支架促进晚期软骨缺损修复的可能机制.方法:采用超速离心法从野生型 HIF-1α和突变型 HIF-1α修饰的BMSCs中分别提取外泌体(BMSCs-ExoWT与BMSCs-ExoMU),同时对其进行鉴定.在体外,采用白细胞介素1β(IL-1β)诱导软骨细胞发生炎症反应,分别将等量 PBS、BMSCs-ExoWT (80 mg·L-1)和BMSCs-ExoMU(80 mg·L-1)分别与炎症反应下的软骨细胞共培养,实验分为空白组、炎症组、BMSCs-ExoWT组和 BMSCs-ExoMU组,利用 Hoechst33342染色检测各组软骨细胞凋亡小体数目;应用Western blotting法检测各组软骨细胞中 AKT/p-AKT、ERK/p-ERK和 p38/p-p38表达水平.12只新西兰兔随机分为4组,建立兔膝关节软骨缺损模型,分别将等量的生理盐水、支架+生理盐水、支架+BMSCs-ExoWT和支架+BMSCs-ExoMU作用于4组兔软骨缺损处.术后6周取材,通过大体观察、苏木素-伊红(HE)染色和蕃红 O-固绿染色观察和比较各组软骨缺损的修复效果.结果:成功提取并鉴定 BMSCs-ExoWT与 BMSCs-ExoMU,电镜观察外泌体形态为近圆形,直径为40~100 nm;Western blotting法显示两者分别表达特异性蛋白 CD63和CD81.在体外实验中,炎症环境下BMSCs-ExoMU组软骨细胞凋亡小体数目低于炎症组和BMSCs-ExoWT组(P<0.01);Western blotting法,BMSCs-ExoMU组和BMSCs-ExoWT组软骨细胞中 p-ERK1和 p-ERK2水平低于炎症组(P<0.05),p-AKT和p-p38水平高于炎症组(P<0.05);且BMSCs-ExoMU的作用强于BMSCs-ExoWT(P<0.05).在兔膝关节晚期软骨缺损模型中,支架+BMSCs-ExoMU组缺损处修复效果优于空白组、支架组和支架+BMSCs-ExoWT组.结论:软骨支架与BMSCs-ExoMU共同作用于软骨缺损处可促进缺损修复.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏永蔚	锦州医科大学附属第一医院运动与关节科	5	11	2.0	3.0
2	周山健	锦州医科大学附属第一医院运动与关节科	4	7	2.0	2.0
3	刘丹平	锦州医科大学附属第一医院运动与关节科	17	27	2.0	4.0
4	田大川	锦州医科大学附属第一医院运动与关节科	4	8	2.0	2.0
5	李海乐	河南省漯河市中心医院创伤骨科	2	4	1.0	2.0
6	肖大伟	锦州医科大学附属第一医院运动与关节科	4	8	2.0	2.0
7	綦惠		7	32	2.0	5.0