RNA干扰技术沉默星形胶质细胞Cdk5模型的建立

• 作者: 刘晨辰 徐沙贝 王伟 谢敏杰 龙根
• 来源期刊: 生物医学工程与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 星形胶质细胞 细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdk5) RNA干扰 特异性模型 鼠
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 315-319
• 页数: 5页
• 分类号: R394
• 语种: 中文
• DOI: 10.13339/j.cnki.sglc.20180517.017

摘要

目的 建立星形胶质细胞细胞周期蛋白依赖性激酶5 (Cdk5) 沉默模型.方法 新生24 h内无特定病原 (SPF) 级SD雄性大鼠乳鼠240只.培养及鉴定SD雄性大鼠星形胶质细胞.设计合成针对星形胶质细胞Cdk5的小干扰RNA (siRNA) 3种 (Si-r-Cdk5-001、Si-r-Cdk5-002及Si-r-Cdk5-003), 将3种siRNA分为SiT1组、SiT2组、SiT3组, 在Lipofectamine 2000介导下转染星形胶质细胞;阴性对照组加入阴性对照si RNA.应用荧光染色观察转染效率, 通过实时聚合酶链反应 (PCR) 和Western blot检测沉默效率.结果 成功将Cdk5 siRNA转染入星形胶质细胞, 转染效率为85％.与阴性对照组相比, SiT1组、SiT2组及SiT3组Cdk5 mRNA及蛋白表达均降低 (P＜0.01), 其中SiT3组沉默效果最佳, 分子水平沉默效率为68％, 蛋白水平沉默效率为79％.结论 成功通过RNA干扰技术建立星形胶质细胞Cdk5特异性沉默模型.