泛素特异性蛋白酶46的分子克隆及基因突变对其功能的影响

• 作者: 刘淑霞 吕红芝 张景坤 张玮 祁素芬 秘迎君 贾媛 赵静 魏群
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 基因克隆 usp46 基因表达水平 酶活性 基因突变
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 937-944
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2018.06.0369

摘要

该文探讨了行为绝望相关基因——泛素特异性蛋白酶46(usp46)基因的生物学功能及编码区错义突变对其功能的影响.从人类食管癌细胞株TE-1中提取总RNA,RT-PCR扩增获得人类usp4基因,qRT-PCR佥测小鼠各组织中该基因的mRNA相对表达水平;运用去泛素化酶活性检测体系,将USP46与模型底物表达质粒共转化,研究USP46的活性;采用定点突变法构建错义突变V89I,用上述方法检测突变对酶活性的影响.结果发现,人类usp46基因具有1 101 bp的开放阅读框,编码366个氨基酸;序列比对显示,其在各个物种中高度保守;在小鼠脾脏中mRNA表达量较高,而骨骼肌中表达较少;人类的USP46蛋白具有去泛素化酶活性,V89I突变后,其活性显著下降,仅为野生型的37.67％+2.52％(P＜0.05).结果表明,usp46基因在小鼠各组织中的mRNA表达水平存在差异;人类USP46蛋白具有去泛素化酶活性,而且其编码区V89I错义突变后,其活性显著下降,为抑郁症等神经精神性疾病的病因学研究提供了新的线索.